中华鳖红脖子、红底板病的病原分离鉴定

为检测广东某鳖场大批死亡的以红脖子、红底板败血型为主要特征的甲鱼 ,对病死甲鱼进行了病原分离与鉴定。采用现场用抗嗜水气单胞菌血清与病死鳖血液作血清学直接凝集反应 ,另外对病死甲鱼进行细菌、病毒分离鉴定。结果表明 ,血清学直接凝集反应为阳性 ,自同一病例中既分离到细菌——嗜水气单胞菌 ,又分离到病毒—类副黏病毒。该菌对小鼠的LD50 为 3 .5× 10 5CFU。病鳖组织滤液接种 8日龄 SPF鸡胚卵黄囊 ,自 F3 开始羊水有血球凝集现象。滤液及 F3羊水经超速离心作电镜样品观察 ,都有多形态带囊膜的类副黏病毒。细菌、病毒相继人工感染甲鱼 ,结果发现病毒不致死甲鱼 ,而细菌是致死甲鱼的主要病原     

几种培养因子对喹诺酮类药物抑制体外嗜水气单胞菌活性的影响

研究了培养基酸碱度(pH)、镁离子(Mg2+)、细菌接种量及小牛血清对4种喹诺酮药物抑制鱼类体外病原菌嗜水气单胞菌Aeromonashydrophila的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的影响。结果表明,当pH为7和8时,4种药物的MIC和MBC均最小,当pH升高或降低时,MIC和MBC均明显升高,抑菌活性明显降低。Mg2+对4种药物的体外抗菌活性均有不同程度的影响,随着Mg2+浓度的升高,环丙沙星和恩诺沙星的MIC和MBC均升高;当Mg2+浓度为0～2 0mg/mL时,二氟沙星的MIC无明显变化;Mg2+浓度为1 0mg/mL时,二氟沙星的MBC由0 8μg/mL上升到3 2μg/mL,单诺沙星的MIC为0 00625μg/mL,但随着Mg2+浓度的增加,MIC和MBC均有升高。细菌接种量为102～105CFU/mL时,环丙沙星和二氟沙星的MIC和MBC均无变化,只有当菌数增至106CFU/mL时,MIC和MBC才开始随着接种细菌量的增加而增加。血清能明显降低4种喹诺酮类药物的体外抑菌活性。     

Cloning, nucleotide sequence and phylogenetic analyses, and tissue-specific expression of the transferrin gene in Cirrhinus mrigala infected with Aeromonas hydrophila

Transferrin partial complementary DNAs were cloned from the livers of five species in four genera of Indian carps (Indian major carp species: Labeo rohita, Catla catla and Cirrhinus mrigala; medium carp: Puntius sarana; minor carp: Labeo bata) subsequent to polymerase chain reaction amplification with published heterologous primers or self-designed primers derived from conserved regions of transferrin cDNA sequences. The partial transferrin cDNAs of the five species of carps had sizes from 624 to 633 bp (487 bp for L. rohita) and encoded an open reading frame consisting of 206–211 (162 for L. rohita) amino acids. The alignments of carp cDNA sequences showed 85–97% homology and 71–93% homology in deduced amino acid sequences. A phylogenetic tree of amino acid sequences of transferrin cDNAs from carps showed that the relationship among the four genera of Indian carps is well correlated with that derived from classic morphologic analyses. The hypothesized cleavage site and interdomain bridge of transferrin molecule were predicted for the above carp species and interestingly the cleavage site amino acid sequence was found to be conserved among all the carps. To study the tissue-specific expression of the transferrin gene, various tissues (liver, kidney, spleen, brain, muscle, testis, heart, intestine, gill and fin) from apparently healthy (control), moribund and survived C. mrigala experimentally infected with Aeromonas hydrophila infection were analyzed. Transferrin mRNA was detected only in liver RNA and to lesser extent in brain tissue out of the 10 tissues analyzed irrespective of bacterial infection.     

绿色荧光蛋白基因标记嗜水气单胞菌的研究

嗜水气单胞菌广泛存在于水体环境中,可引起人和动物发病,尤其是引起鱼类的败血症。本文构建了pWSK129-gfp重组载体,并分别导入到嗜水气单胞菌强毒株J-1和无毒株4332中。在荧光显微镜下观察,菌体呈现绿色荧光。稳定性试验表明,Ah4332GFP传至70代,质粒稳定率可达100%;而AhJ-1GFP在同样条件下培养10代后,质粒的稳定率仅为15.1%。绿色荧光蛋白基因的导入为研究嗜水气单胞菌与宿主的相互关系提供了一种简单而直观的方法。     

团头鲂细菌性败血症的病理学研究

报道了由温和气单胞菌(Aerom onas drophila)感染团头鲂引起细菌性败血症的病理学变化。通过对人工感染病例的病理学观察,发现病理变化主要表现为鱼体多处出血,特别是体表的出血最为明显;有淡红色浑浊黏液状腹水,肛门红肿外突;心、肝、肾、肠等内脏器官充血、出血、肿大、变性、坏死以及红细胞发生溶血;血液学生理指标上表现出红细胞大量减少,白细胞大量增加等细菌性败血症的病理特征,并在病理变化观察的基础上探讨了该病发生的机理。     

MGB探针实时定量PCR检测致病性嗜水气单胞菌

以嗜水气单胞菌气溶素（aerolysin）基因为待检靶基因,设计一对引物和一条MGB（Minor Groove Binder）探针,Aero基因探针5’端用FAM基团标记,3’端用TaqMan—MGB标记。建立并优化了检测嗜水气单胞菌荧光定量PCR方法,可检测的最低细菌数为1．25×10^0CFU/μl;试验中嗜水气单胞菌检测结果均为阳性,而非嗜水气单胞菌检测结果均为阴性;重复性试验中,批间差异小于5％,批内差异小于3％。试验结果显示,荧光定量PCR方法可对致病性嗜水气单胞菌株进行快速鉴定。该方法的建立为致病性嗜水气单胞菌的检测提供了一种简便、快速的途径,是一种比较实用的致病性嗜水气单胞菌的检测方法。     

山瑞鳖嗜水气单胞菌感染的诊断及防治

从患病山瑞鳖的肝脏、肺脏分离到1株细菌,对该菌的形态特征、生理生化进行分析,初步鉴定为嗜水气单胞菌。采用BioFosun-Ⅰ微生物鉴定系统对该菌进一步鉴定,结果显示为嗜水气单胞菌,可能性概率（PROB）为99%,相似性指数（SIM）和位距指数（DIS）分别为0.989和0.099。综合形态特征、生理生化特点及微生物鉴定系统鉴定结果,可将从发病山瑞鳖分离到的病原鉴定为嗜水气单胞菌。人工感染试验表明,该嗜水气单胞菌是引起山瑞鳖发病的病原且具有高度致死性;药敏试验结果则表明,该菌对头孢哌酮、阿米卡星、氧氟沙星、恩诺沙星4种药物敏感;选用头孢哌酮和恩诺沙星对病鳖进行治疗,可获得较好的治疗和控制效果,为今后山瑞鳖养殖生产中更有效地防制由该菌引起的疾病提供参考。     

早春季节罗非鱼源嗜水气单胞菌的分离鉴定

2012年早春季节广西柳州市某罗非鱼养殖场出现暴发性疾病,从患病罗非鱼的肝脏、肾脏和脾脏组织中分离到1株革兰氏阴性杆菌。通过生理生化试验和16S rDNA序列分析,鉴定该菌为嗜水气单胞菌。人工感染试验结果显示,分离菌株对罗非鱼有很强的毒力,该菌注射浓度为1×10⁹ CFU时,可使健康罗非鱼在24 h内全部死亡;药物敏感试验结果显示,分离菌株仅对氨苄西林耐药,对氨曲南、氧氟沙星等15种抗生素敏感。本研究为早春季节罗非鱼疾病防控提供试验依据。     

库拉索芦荟提取物对维氏气单胞菌抑菌作用的研究

采用榨汁法、水煮法和醇提法制备库拉索芦荟提取物,通过K-B法和二倍稀释法测定3种方法芦荟提取物对维氏气单胞菌的抑菌作用。结果显示,用3种方法制备的库拉索芦荟提取物对维氏气单胞菌均有不同程度的抑制作用,榨汁法、水煮法和醇提法得到的库拉索芦荟提取物对3株维氏气单胞菌的平均最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)分别为1、0.5和0.125 g/mL,最小杀菌浓度(minimal bactericidal concentration,MBC)分别为1、1和0.25 g/mL。库拉索芦荟提取物对3株维氏气单胞菌均有抑制作用,芦荟提取物浓度越高抑菌效果越明显,其中醇提法的抑菌效率高,水煮法的抑菌作用其次,榨汁法的抑菌效果较弱。